Avaliação eletroforética, cromatográfica e molecular da Hb D Los Angeles no Brasil / Electrophoretical, chromatographic and molecular valuations of Hb D Los Angeles in Brazil

A variante de hemoglobina (Hb) D mais comum, Hb D Los Angeles ou D Punjab, é originada de uma transversão GAA->CAA no códon 121 da globina beta; essa mutação resulta na substituição do ácido glutâmico por glutamina na proteína. É a terceira variante de hemoglobina mais freqüente da população brasileira. Como as hemoglobinas D apresentam migração similar à hemoglobina S em pH alcalino, e com a hemoglobina A em pH ácido, são necessários vários testes para o correto diagnóstico. No presente estudo objetivou-se relacionar os diferentes procedimentos laboratoriais de rotina diagnóstica, além da análise molecular, para estabelecer o perfil de Hb D Los Angeles no Brasil. Foram analisados 47 indivíduos da população brasileira com provável Hb D Los Angeles, por vários procedimentos eletroforéticos em diferentes condições de pH, além da cromatografia líquida de alta pressão, e testes moleculares para confirmação da mutação. Foram encontrados quatro tipos de combinações de hemoglobinas: 42 indivíduos portadores de hemoglobina AD Los Angeles, dois indivíduos com doença de Hb S/D Los Angeles, dois indivíduos com Hb D Los Angeles e talassemia beta e um indivíduo com Hb D Los Angeles e Hb Lepore. Os indivíduos heterozigotos para D Los Angeles são assintomáticos, entretanto, em associação com outras variantes e talassemias podem apresentar graus variáveis de manifestações clínicas. Os resultados apresentados enfatizaram a necessidade da associação de várias metodologias para a identificação da Hb D Los Angeles, além de auxiliar na elucidação de combinações raras

The most common Hb D variant, the Hb D-Los Angeles,also know as Hb D-Punjab, originates through aGAA¨CAA change at the 121 codon of the ƒÀ globingene; this mutation results in the replacement ofglutamic acid for glutamine in the protein. It is thethird most common hemoglobin variant in theBrazilian population. This variant has electrophoreticmigration in alkaline pHs similar to Hb S and identicalmigration to hemoglobin A in acidic pHs. Thus, severaltechniques are necessary for its correct diagnosis. Thepurpose of this work was to relate the differentlaboratorial techniques and molecular analyses to determinethe profile of Hb D Los Angeles in Brazil. Fortysevenindividuals from the Brazilian population withHb D Los Angeles were studied. Multiple electrophoresisin several experimental conditions were carried out,in addition to high performance liquid chromatography (HPLC) and molecular analysis to confirm thismutation. Four compound heterozygotes were observed:42 individuals heterozygous Hb AD Los Angeles, twowith Hb S/D Los Angeles disease, two individuals withHb D Los Angeles and beta-thalassemia and one withHb D Los Angeles and Hb Lepore. The heterozygoushemoglobin D Los Angeles is asymptomatic, even thoughits association with other variants and thalassemias maypresent varying degrees of clinical manifestations. Theresults presented emphasize the significance of theassociation of different laboratorial techniques for DLos Angeles diagnosis, and help to elucidate rarecombinations.

Hemoglobinas anormais e dificuldade diagnóstica / Abnormal hemoglobins

As hemoglobinas humanas, com padrão de herança definido geneticamente, apresentam variações polimórficas características dentro de nossa população, na dependência dos grupos raciais que formam cada região. Aparecem sob a forma de variantes de hemoglobinas ou talassemias, sendo mais freqüentes, no Brasil, os tipos variantes S e C e as talassemias alfa e beta, todas na forma heterozigota. Durante o ano de 1999, amostras de sangue de 506 indivíduos com anemia a esclarecer ou que já passaram por alguma triagem de hemoglobinopatias foram encaminhadas ao Centro de Referência de Hemoglobinas da UNESP, para confirmação diagnóstica e submetidas a procedimentos eletroforéticos, análises bioquímicas e citológicas, para caracterização das hemoglobinas anormais. O objetivo do presente estudo foi verificar quais tipos de hemoglobinas anormais apresentam maior dificuldade diagnóstica. As amostras foram provenientes de 24 cidades de doze estados. Os resultados mostraram que 354 indivíduos (69,96 por cento) apresentaram hemoglobinas anormais, sendo 30 Hb AS (5,93 por cento), 5 Hb AC (0,98 por cento), 76 sugestivos de talassemia alfa heterozigota (15,02 por cento), 134 sugestivos de talassemia beta heterozigota (26,48 por cento) e 109 com outras formas de hemoglobinas anormais (21,54 por cento), que incluem variantes raras e interações de diferentes formas de talassemias e hemoglobinas variantes. Concluiu-se que, apesar da melhoria técnica oferecida atualmente e a constante formação de recursos humanos capacitados, as talassemias em sua forma heterozigota (210 indivíduos -- 41,50 por cento) são responsáveis pela maior dificuldade diagnóstica, seguido da caracterização de variantes raras e formas interativas de hemoglobinopatias (109 indivíduos -- 21,54 por cento), sugerindo que se deve aumentar a capacidade de formação de pessoal e as informações a respeito destas alterações genéticas em nossa população.

The human hemoglobins, with genetically definedinheritance patterns, have shown characteristicpolymorphic variation within the Brazilianpopulation, depending on the racial groups of eachregion. They have appeared under the form ofhemoglobin variants or thalassemias, the varianttypes S and C and the alpha and beta thalassemiasbeing more common, all of them in heterozygoteform. During the year of 1999, blood samples from506 individuals, with suspected anemia or thathad already passed through hemoglobinopathiesscreening, were sent to the Hemoglobin ReferenceCenter – UNESP for diagnostic confirmation andsubmitted to electrophoresis proceedings,biochemical and cytological analyses in order tocharacterize the type of abnormal hemoglobins.The goal of the present study was to verify whichabnormal hemoglobin types show greaterdiagnostic difficulty. The samples came from 24cities in twelve states. The results showed that 354(69.96%) individuals presented abnormalhemoglobins, 30 (5.93%) being Hb AS, 5 (0.98%)being Hb AC, 76 (15.02%) suggestive ofheterozygote alpha thalassemia, 134 (26.48%)suggestive of heterozygote beta thalassemia and 109(21.54%) with other forms of abnormalhemoglobin, including rare variants and differentforms of thalassemias and variant hemoglobininteractions. It has been concluded that, despitethe improved techniques currently available anda constant influx of capacitated personnel, theheterozygote form of thalassemias (210 individuals– 41.50%) is challenging to diagnose, followed indifficulty by rare variant characterization andinteractive forms of hemoglobinopathies (109individuals – 21,54%), suggesting that the capacityfor production of qualified professionals andinformation about these genetic changes in ourpopulation should be increased.